试运行主要是按试验大纲要求，原则上利用不少于一个月的时间，进行列车运行图参数测试、故障模拟、应急救援演练、按图行车试验等项目测试，模拟线路正式运营状态玉女芳踪之上海故事，对高铁运输组织、列车接发、开行密度、设备状态等方面进行的一次全面“实战”检测，为正式开通运营提供科学依据。试运行使用的列车采用运营动车组担当，沿途各站模拟办理客运业务。
沪苏湖高铁于2020年6月开工，2024年6月全线铺轨贯通，8月开始静态验收，9月开始联调联试。自联调联试以来，检测列车、综合检测列车、重联动车组等先后上线，以不同速度等级进行往返检测试验以及全线拉通试验，共开行各类试验列车775列，检测总里程达52463公里，综合检测列车试验最高时速达385公里，安全、优质、高效完成了各项联调联试检测任务。沪苏湖高铁试运行将持续1个月左右时间，预计12月底具备开通运营条件。
“沪苏湖高铁开通后，将大大方便我们苏州吴江人的出行。”上海客运段高铁四车队列车员王晓君是江苏省苏州市吴江区人，她告诉澎湃新闻记者，现在吴江人长途出行主要是自驾，还有乘坐客运大巴，地铁开通后，需要先乘坐地铁再转高铁，“现在吴江人如果去上海虹桥站，地铁加高铁要近3个小时，也不方便”。“（沪苏湖高铁开通后）苏州南站离吴江自驾20分钟玉女芳踪之上海故事，坐上高铁也就20-30分钟就能到达上海虹桥站了玉女芳踪之上海故事，不论是到上海，还是到苏州周边城市都会方便很多。”王晓君说。
沪苏湖高铁是上海、苏州、湖州基础设施互联互通的重大项目，也是长三角高铁联网、补网、强链的重点项目。建成运营后，将进一步优化上海铁路枢纽布局，完善区域路网布局，有效疏解沪宁、沪杭铁路通道运输压力，便利沿线人民群众出行，对于打造“轨道上的长三角”、促进沿线经济社会发展和长三角一体化高质量发展等具有重要意义。